DLL4蛋白真核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 刘霞 周鹏 甘志凯 金巧
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: DLL4 真核表达 亲和纯化 多克隆抗体 大分子互作仪
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 175-180
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0376

摘要

该研究旨为克隆、表达和纯化出人源DLL4蛋白,并制备出相对应的多克隆抗体.采用搭桥PCR,构建带有tPA信号肽的DLL4基因,并克隆到pGZX表达载体上,经过酶切和测序鉴定后,瞬时转染到HEK293F细胞中,转染48 h后对发酵上清液进行镍柱亲和纯化.利用Dot blotting、Western blotting和Fortebio大分子互作仪检测DLL4的生物活性;免疫兔子制备DLL4多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体效价,Western blotting检测抗体特异性.PCR扩增出1.6 kb的tPA-DLL4-6His目的片段,测序结果表明,与NCBI数据库中的DLL4序列(NM_019074.3)相同.一步亲和纯化后,得到纯度为95％的DLL4蛋白,Dot blotting和Western blotting检测到发酵上清液中含有DLL4蛋白,DLL4蛋白和DLL4抗体之间的亲和力在1.848E-10,R2=0.999,ELISA法获得DDL4抗体效价为1∶12 800,Western blotting检测DLL4抗体具有良好的特异性.成功制备出具有免疫原性的DLL4蛋白及其多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘霞		23	63	4.0	7.0
2	周鹏		12	0	0.0	0.0
3	甘志凯		9	17	2.0	4.0
4	金巧		11	20	3.0	4.0