过表达 C3 aR 人足细胞的构建及鉴定

• 作者: 刘志红 尹广 赵文紧 郑敬民
• 来源期刊: 东南国防医药
• 学科: 医学
• 关键词: C3 a受体 慢病毒 肾小球足细胞 过表达
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 561-565
• 页数: 5页
• 分类号: R363.1
• 字数: 4689字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-271X.2014.06.001

摘要

目的：构建过表达C3a受体（C3aR）的肾小球足细胞株，为探讨C3aR在肾小球足细胞中的确切生理和病理意义提供细胞模型。方法设计合成人C3aR 表达单元，将其克隆到慢病毒表达载体pLenti6．3-MCS-IRES2-EGFP的多克隆位点，构建成C3aR表达载体pLenti6．3-C3aR-IRES2-EGFP；将pLenti6．3-C3aR-IRES2-EGFP和包装质粒共转染293 T细胞，包装成C3aR表达重组慢病毒LV-C3aR；以LV-C3aR感染人肾小球足细胞系HPC，根据LV-C3aR上带有杀稻瘟菌素抗性基因的特点，以杀稻瘟菌素筛选稳定转染细胞克隆；利用荧光定量PCR和细胞免疫化学分析方法对稳定转染细胞克隆的C3aR表达水平进行分析，从中鉴定出稳定过表达C3aR的人肾小球足细胞株。结果成功构建了C3aR表达载体pLenti6．3-C3aR-IRES2-EGFP；得到了高滴度的C3aR表达重组慢病毒LV-C3aR；成功构建了过表达C3aR的人肾小球足细胞株HPC-C3aR。结论成功构建C3 aR表达载体和过表达C3 aR的人肾小球足细胞株，为进一步研究C3 aR过表达在人肾小球足细胞中的病理意义提供了很好的细胞模型，也为进一步开展C3 aR在其他细胞中的生理、病理意义创造了条件。