小鼠抗人前B细胞白血病同源盒基因3多克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 张媛 王力民 赵威 韩海勃
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 前B细胞白血病同源盒基因3 融合蛋白表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 1176-1179
• 分类号: R392.11|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 制备前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)多克隆抗体.方法 采用反转录PCR扩增PBX3基因区序列,并重组入原核表达载体pGEX-4T-1,重组载体转化BL21大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导GST-PBX3融合蛋白的表达.SDS-PAGE纯化融合蛋白,并用GST-PBX3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,收集经过免疫的小鼠血清即抗PBX3的多克隆抗血清,采用间接ELISA检测其效价,通过免疫细胞化学技术及Western blot法鉴定其特异性.结果 成功构建pGEX-4T-1/PBX3原核表达载体,转化BL21菌株后可高效表达GST-PBX3融合蛋白,且以不可溶包涵体形式存在.SDS-PAGE纯化蛋白并免疫小鼠产生的抗PBX3血清可特异识别细胞外源过表达的PBX3蛋白,同时可检测到细胞外源性PBX3蛋白的细胞内定位情况.结论 获得效价和特异性良好的PBX3多克隆抗体.