小鼠TIM-3原核表达载体的建立及多克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 刘敏 徐春利 杨东亮 郝友华 郭艳 陆孟吉 陈悦 马德强
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: TIM-3 蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 158-162
• 分类号: R392.33
• 字数: 2687字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.02.014

摘要

目的:克隆小鼠TIM-3基因,构建原核表达载体,制备相应的多克隆抗体并初步鉴定.方法:以小鼠脾细胞总RNA为模板,用RT-PCR方法,扩增得到TIM-3基因编码区,构建pRSET-B-TIM-3原核表达载体;经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白;然后常规免疫家兔,制备多克隆抗体;用ELISA方法检测抗体的效价,用Western blot、免疫组化、流式细胞术检测抗体的特异性.结果:成功构建的原核表达载体pRSET-B-TIM-3在大肠杆菌中诱导后可以高效表达TIM-3蛋白;免疫获得的多克隆抗体经过ELISA检测,抗体效价为1:320 000,经Western blot、免疫组化和流式细胞术等鉴定,抗体的特异性较好.结论:成功克隆出小鼠的TIM-3基因,构建了原核表达载体,制备的兔抗小鼠TIM-3多克隆抗体具有较高的效价和良好的特异性.