miR-126报告基因载体的构建及其功能鉴定

• 作者: 卞兆连 盛黎 虢灿杰 马雄
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: miR-126 荧光素酶报告基因 靶基因
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 801-804
• 分类号: Q75|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2014.05.001

摘要

目的:根据miR-126的预测靶点构建荧光素酶报告基因重组质粒,并进行功能鉴定.方法:利用sanger数据库提供的miR126靶序列设计引物,PCR扩增目的微小RNA (microRNAs,miRNAs)靶基因3’非编码区(three-prime untranslated regions,3'UTRs)序列,PCR产物双酶切,后连入经过同样双酶切的pGL3-control载体中,连接产物转化大肠杆菌DH5α,进行阳性克隆鉴定.同样,将候选靶基因3' UTRs突变,突变型3'UTR克隆入pGL3-control报告载体,构建野生型和突变型的报告基因重组质粒.将野生型和突变型的报告基因载体分别和化学合成的microRNA以及内参质粒共转染293TN细胞,进行双荧光素酶检测.结果:成功构建miR-126报告基因野生型和突变型重组质粒pGL3-VEGF-A-3'UTR和pGL3-VEGF-A-3'UTR,质粒测序及酶切结果完全正确.瞬时转染实验显示,过表达miR-126能直接抑制VEGF-A-3'UTRs报告基因活性.结论:miR-126对VEGF-A具有靶向调节功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马雄	上海交通大学医学院附属仁济医院消化所及消化科	61	251	9.0	13.0
2	虢灿杰	上海交通大学医学院附属仁济医院消化所及消化科	16	52	4.0	6.0
3	盛黎	上海交通大学医学院附属仁济医院消化所及消化科	8	29	3.0	5.0
4	卞兆连	上海交通大学医学院附属仁济医院消化所及消化科	8	10	2.0	3.0