NF-κB 结合元件缺失对 NOX1启动子转录活性的影响

• 作者: 吴炜景 徐采云 李理 黄文杰
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: NADPH氧化酶1 NF-κB 急性肺损伤 启动子 转录因子
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1729-1734
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 4557字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2014.10.001

摘要

目的：构建含NADPH氧化酶1（NOX1）近端启动子区的pGL3萤光素酶报告基因载体及缺失NF-κB结合元件的相应载体，分别测定其相应活性，探讨NF-κB结合元件缺失对NOX1启动子区转录活性的影响。方法：采用PCR法克隆NOX1启动子区序列（1415 bp），将目的片段与pGL3萤光素酶载体分别双酶切、纯化后进行连接（pGL3-NOX1-1415），测序鉴定；应用Alibaba 2．1软件分析NOX1近端启动子区，获取NF-κB结合元件；重叠PCR法将含该元件的启动子区域（88 bp）缺失，并构建相应载体（pGL3-NOX1-1327）。将两载体分别与pRL-TK内参质粒瞬时转染进入A549细胞，采用TNF-α（10μg/L）刺激细胞24 h，萤光酶标仪检测A549细胞的萤光素酶活性。结果：测序鉴定结果提示pGL3-NOX1-1415及NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327载体构建成功；细胞实验显示，TNF-α刺激后，转染pGL3-NOX1-1415的A549细胞萤光素酶活性明显强于对照组（P＜0．05），而转染NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327的细胞萤光素酶活性明显低于转染pGL3-NOX1-1415组（ P＜0．05）。结论：TNF-α诱导A549细胞NOX1基因活化与NF-κB密切相关，NF-κB参与了TNF-α诱导的NOX1基因启动子的转录调控。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄文杰	广州军区广州总医院呼吸内科	127	756	15.0	21.0
2	李理	广州军区广州总医院呼吸内科	46	307	10.0	15.0
3	吴炜景	福建医科大学附属第二医院呼吸内科	15	127	5.0	11.0
7	徐采云	广州军区广州总医院呼吸内科	1	4	1.0	1.0