改良RNA提取法应用于RT-PCR检测O157∶H7活菌

• 作者: 吕红亮 张娟胜 王国庆 罗影殊 阿娜尔古丽·伊敏 黄偌颖
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 RNA 逆转录聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用
• 页码范围: 1658-1661
• 分类号: R115
• 语种: 中文

摘要

目的 将改良的RNA提取法应用于RT-PCR,建立一种快速灵敏检测肠出血性大肠杆菌O157:H7活菌的方法.方法 以O157∶H7 rfbE基因为靶基因设计引物,样品中加入较大浓度的非目标菌后,用TRIzol试剂提取细菌总RNA后,gDNA Eraser去除其中污染的DNA,通过RT-PCR检测O157∶H7 rfbE的mRNA.结果 RT-PCR法能有效检测样品中的O157∶H7活菌,死菌不被检测.未加入非目标菌(志贺菌)检测O157∶H7检出限为3.4×108 cfu/ml,加入非目标菌共沉淀提取RNA,检出限下降至3.4×105 cfu/ml,检测灵敏度提高了1 000倍.结论 改良RNA提取法应用于RT-PCR能够快速灵敏检测O157∶H7活菌,在突发公共卫生事件的应急处理方面有良好的应用前景.