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摘要:
目的 构建CCDC67基因慢病毒表达载体,为后续转染目的细胞奠定基础,并实现在细胞中高效、稳定表达.方法 从含有CCDC67基因的cDNA文库中,利用PCR方法钓取CCDC67基因编码区片段.将目的基因与酶切载体pGV-208进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞.对长出的克隆先进行菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,对比正确的克隆即为构建成功的目的质粒.将构建成功的目的质粒和两种辅助包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒,在荧光显微镜下观察慢病毒转染293T细胞后荧光表达情况.采用Western blot检测CCDC67及绿色荧光蛋白融合蛋白表达情况.结果 PCR产物经电泳分析表明成功获取CCDC67基因cDNA克隆,测序结果显示慢病毒转染质粒连接构建正确.荧光表达检测显示293T细胞中产生慢病毒颗粒,Western blot显示CCDC67在细胞内稳定表达.结论 成功构建CCDC67基因慢病毒表达载体,为后续转染目的细胞后从分子水平探讨CCDC67基因功能奠定了实验基础.
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文献信息
篇名 CCDC67基因慢病毒表达载体的构建及鉴定
来源期刊 中华内分泌外科杂志 学科
关键词 CCDC67 293T细胞 慢病毒载体
年,卷(期) 2015,(1) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 30-33
页数 4页 分类号
字数 3103字 语种 中文
DOI 10.3760/cma.j.issn.1674-6090.2015.01.010
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 殷德涛 郑州大学第一附属医院甲状腺外科 76 429 12.0 16.0
2 江金花 23 200 8.0 14.0
3 王庆端 29 285 9.0 16.0
4 张艳 15 42 3.0 5.0
5 李红强 郑州大学第一附属医院甲状腺外科 14 125 5.0 11.0
6 王勇飞 郑州大学第一附属医院甲状腺外科 8 63 5.0 7.0
7 许建辉 郑州大学第一附属医院甲状腺外科 5 22 2.0 4.0
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研究主题发展历程
节点文献
CCDC67
293T细胞
慢病毒载体
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中华内分泌外科杂志
双月刊
1674-6090
11-5807/R
大16开
重庆市渝中区袁家岗友谊路1号重庆医科大学附属第一医院
2007
chi
出版文献量(篇)
2271
总下载数(次)
19
总被引数(次)
6033
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
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