MICB基因的克隆表达及其在抗体测定中的初步应用

• 作者: 何吉 吕杭军 和艳敏 应燕玲 朱发明 陶苏丹
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: MICB 蛋白表达纯化 抗体测定
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 应用技术
• 页码范围: 611-615
• 页数: 5页
• 字数: 3814字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2015.08.012

摘要

目的：构建可行的MICB ( major histocompatibility complex class Ⅰ chain-related gene B)基因原核表达系统及蛋白质纯化体系,利用表达纯化蛋白建立ELISA方法初步应用于肾移植患者中MICB抗体的检测。方法外周血RNA经RT-PCR和特异性引物扩增获得MICB基因cDNA, MICB cDNA和原核表达载体pET-28a分别双酶切后连接构建重组表达载体,转染宿主菌E. coli BL21 DE3,IPTG诱导表达。亲和层析的Ni-NTA Spin纯化蛋白质,并通过Western blot鉴定。利用纯化蛋白建立ELISA法检测肾移植患者中MICB抗体。结果构建3个MICB常见等位基因2、3外显子的pET-28a-MICB重组表达体系,经Ni-NTA Spin纯化获得重组的MICB蛋白,Western blot鉴定。利用3个不同MICB蛋白质成功构建了ELISA方法,初步检测24份肾移植患者标本MICB抗体,显示不同的重组蛋白敏感性存在差异。结论本研究建立MICB基因克隆与体外表达技术,鉴定并纯化具有生物活性的蛋白质,同时建立MICB抗体检测的ELISA方法,为进一步研究MICB与移植免疫的关系提供基础资料。