盐藻PDS基因的同源克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 周峰 白林含 黄非
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 盐藻PDS基因 同源克隆 原核表达 PLtac启动子 Mistic序列
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 遗传和分子生物学
• 页码范围: 149-155
• 分类号: Q933
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20140196

摘要

[目的]八氢番茄红素脱氢酶PDS为真核膜结合蛋白,我们通过更换不同的表达策略,探索在大肠杆菌中表达真核膜结合蛋白的方式.[方法]利用RACE的方法克隆盐藻PDS的全长cDNA序列.利用原核表达载体pET-28a构建pET-28a-PDS表达载体;使用PLtac启动子替换T7启动子构建pET-PLtac-PDS表达载体;合成Mistic序列融合入pET-28a中构建了pET-Mistic-PDS融合表达载体.分别转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达.[结果]获得了盐藻PDS基因的全长cDNA序列2237 bp,开放阅读框为1749 bp,共编码582个氨基酸(NCBI登录号为GQ923693.1).利用pET-28a-PDS和pET-PLtac-PDS表达的PDS蛋白表达量低,并以包涵体形式存在;利用pET-Mistic-PDS载体表达的PDS蛋白表达量明显提高,且大部分以可溶蛋白形式存在,具有脱氢酶活性.[结论]实验结果表明Mistic作为促溶标签能促进膜蛋白的正确折叠,提高蛋白的可溶性.蛋白酶活测定结果证明了Mistic的融合可以保持蛋白的天然活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	白林含	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	31	170	8.0	11.0
2	周峰	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	3	5	1.0	2.0
3	黄非	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	5	12	2.0	3.0