茶树咖啡碱合成酶基因原核表达、及其抗体制备与鉴定

• 作者: 张正竹 李旻 邓威威 金阳 马林龙
• 来源期刊: 植物研究
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 咖啡碱 咖啡碱合成酶 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 333-339
• 页数: 7页
• 分类号: S571.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.7525/j.issn.1673-5102.2015.03.003

摘要

克隆出茶树咖啡碱合成酶基因,对其进行原核表达,并制备TCS1抗体,旨在从蛋白水平研究茶树体内TCS1的表达情况.根据GenBank登陆的TCS1基因的全长cDNA序列,找出其完整的ORF(开放阅读框),从茶树叶片cDNA中克隆了TCS1基因的开放阅读框,连接到pGEX-4T-2表达载体,经IPTG诱导表达重组蛋白pGEX-4T-2-TCS1.进行体外酶活检测后,亲和层析纯化重组蛋白,作为抗原免疫家兔,制备TCS1多克隆抗体.用ELISA方法检测抗体效价,Western blot检测抗体的特异性.通过优化诱导条件,得出重组蛋白的最佳表达条件为:30℃、4h.诱导后的总蛋白、可溶性蛋白与包涵体蛋白均出现一条明显的外源蛋白条带.抗体经ELISA检测,效价为1∶2000,Western blot检测表明抗体具有相对较好的特异性.构建了TCS1原核表达质粒,同时成功制备了抗TCS1的多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张正竹		97	1388	22.0	33.0
2	邓威威		25	104	6.0	9.0
3	金阳		4	5	2.0	2.0
4	李旻		2	47	1.0	2.0
5	马林龙		3	5	2.0	2.0