金黄色葡萄球菌蛋白A Z结构域的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 侯柏龙 叶璐璐 张丽芳 朱珊丽 杜王琪 林晓云 熊一融 薛向阳 陈韶
• 来源期刊: 温州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌 蛋白A 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4055字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-9400.2015.01.001

摘要

目的：制备金黄色葡萄球菌蛋白A（SpA）Z结构域的原核表达蛋白及其多克隆抗体，并对其进行特异性鉴定。方法：3段SpA-Z结构域经柔性肽（GS）串联连接构成三串联体（SpA-3Z），经原核密码子优化后全基因合成，克隆至pET21a（+）载体，构建pET21a（+）/SpA-3Z重组质粒，测序鉴定；将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达重组蛋白，用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western Blot法分析鉴定；纯化的SpA-3Z重组蛋白免疫日本大耳白兔，并分别于免疫前和免疫后采集血清，用ELISA法检测其多克隆抗体的反应和效价，并用Western Blot法分析多克隆抗体结合天然SpA的特异性。结果：成功构建了pET21a（+）/SpA-3Z重组质粒；该重组质粒在原核表达系统表达并获得纯化的SpA-3Z重组蛋白，SDS-PAGE电泳显示该蛋白的分子质量约为21 kDa，与理论分子量大小相符；日本大耳白兔经该蛋白免疫后可产生特异性的多克隆血清IgG抗体，效价可达1：40000；Western Blot法检测结果显示，在分子质量约42 kDa（天然SpA蛋白）处出现单一条带，提示兔多克隆血清抗体可识别天然SpA。结论：SpA-3Z原核蛋白有较好的免疫原性和抗原性，制备的SpA-3Z兔多克隆血清抗体IgG效价高、特异性好，可进一步用于SpA-Z相关的生物学和免疫学等功能研究。