结合内标的小鼠诺如病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 张钰 王静 袁文 赵维波 郭鹏举 黄韧
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 小鼠诺如病毒 荧光定量RT-PCR 内标
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 49-56
• 页数: 8页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 6084字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2015.01.010

摘要

目的 建立一种快速、特异、敏感的荧光定量RT-PCR检测方法,用于小鼠诺如病毒(murine norovir-uS,MNV)的检测.方法 根据MNV ORF1-ORF2结合区域中保守序列设计一对特异性引物和Taqman探针,同时设计和制备了内标用于监控假阴性,建立含有内标的荧光定量RT-PCR检测体系,通过优化,得到最佳反应体系和反应条件;构建质粒标准品并以之为模板绘制标准曲线;进行特异性、敏感性和重复性试验,最后用建立的方法检测344份小鼠临床样本,验证在临床应用中的效果.结果 该方法特异性强,与小鼠肝炎病毒、小鼠脑脊髓炎病毒、仙台病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒Ⅲ型、出血热病毒和淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒不发生交叉反应.构建的荧光定量标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系相关系数r2=0.9986,可以检测到10 copies /μL的质粒标准品,对MNV活病毒检测可检测到1.78×10-2 TCID50/mL的病毒,检测灵敏度比常规RT-PCR高10倍,比病毒分离高100倍.对5份样品进行5次批内和批间重复检测,检测结果变异系数均小于2％.通过对344份临床样品检测,检测到阳性样品103份,阳性率29.94％.有5份样本结果为假阴性.结论 建立的MNV荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,由于加入了内标,能有效地监控假阴性的出现,适合用于MNV日常监测、临床诊断和流行病学调查.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁文	广东省实验动物重点实验室广东省实验动物监测所	18	142	6.0	11.0
2	黄韧	广东省实验动物重点实验室广东省实验动物监测所	168	1009	16.0	22.0
3	张钰	广东省实验动物重点实验室广东省实验动物监测所	42	240	7.0	13.0
4	王静	广东省实验动物重点实验室广东省实验动物监测所	16	117	5.0	10.0
5	赵维波	广东省实验动物重点实验室广东省实验动物监测所	15	80	6.0	8.0
6	郭鹏举	广东省实验动物重点实验室广东省实验动物监测所	4	19	1.0	4.0