西尼罗病毒E蛋白在杆状病毒/昆虫细胞表达系统中的表达及其鉴定

• 作者: 冯娜 曹增国 李倩 李岭 李楠 王化磊 赵国星 郑学星 金宏丽
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 西尼罗病毒 囊膜蛋白 表达
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 129-133
• 分类号: R373.9|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统表达西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)囊膜E蛋白,并进行鉴定.方法 利用分子克隆技术将WNV E基因克隆至杆状病毒供体质粒pFastBacl中,构建重组供体质粒pFastBac-E,转化大肠埃希菌DH 10Bac,构建重组穿梭质粒Bac-E,转染sf9细胞,收获含WNV E基因的重组杆状病毒AcMNPV-E,采用间接免疫荧光及Western blot法检测E蛋白的表达.结果 重组供体质粒pFastBac-E经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,重组穿梭质粒Bac-E经PCR鉴定证明构建正确,转染约96 h后,sf9细胞体积变大、变圆,细胞颗粒化,进而从培养板上脱落,漂浮,收获的第1代AcMNPV-E经PCR鉴定为阳性.感染重组杆状病毒AcMNPV-E的sf9细胞周围出现绿色荧光,表达的目的蛋白可与兔抗WNV E蛋白多克隆抗体及鼠抗His单克隆抗体特异性结合,在相对分子质量约53 000处可见目的蛋白条带.结论 利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统成功表达了WNV E蛋白,为WNV快速诊断方法及新型疫苗的建立奠定了基础.