转录因子Smad2高表达载体的构建和鉴定

• 作者: 伊静 刘莉 李玥 李靖 杜小娟 梁栋 武丽涛 王璇 蓝茜
• 来源期刊: 国外医学（医学地理分册）
• 学科: 医学
• 关键词: 转录因子Smad2 高表达载体 目的片段 重组载体
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 274-277,283
• 页数: 5页
• 分类号: R575.5
• 字数: 3601字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-8883.2015.04.010

摘要

目的 构建并鉴定大鼠转录因子Smad2的高表达载体(简称pLJM1-Smad2).方法 首先以E3大鼠肝脏cD-NA为模板、PCR法获取转录因子Smad2 mRNA CDS区(即目的基因片段);然后用AgeⅠ、EcoRⅠ双酶切pLJM1-MGFP载体和目的基因片段,用T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;之后再将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,扩大培养并提取重组质粒;最后用PCR、AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切以及DNA测序鉴定重组质粒.结果 PCR、AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切结果均提示pLJM1-Smad2重组载体中插入了目的片段Smad2;将含有目的片段的阳性重组体克隆送上海生工进行DNA测序,并将测序结果与NCBI数据库的进行比对,确定插入片段无突变、序列完全正确,证实pLJM1-Smad2重组载体中成功插入了目的基因片段Smad2.结论 成功构建了转录因子Smad2的高表达载体pLJM1-Smad2.