兔瘟病毒VP60基因重组真核表达质粒的构建及其免疫原性

• 作者: 余韬 坤清芳 汪开毓 耿毅 邓梦玲 邓钊彬 陈成 鲁忠祥
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兔病毒性出血症病毒 VP60 pVAX1-VP60 核酸疫苗 免疫原性
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1887-1892
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2015.12.01

摘要

采用RT-PCR方法扩增兔病毒性出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)衣壳蛋白VP60基因,PCR产物纯化后克隆到pMD19-T载体,获得重组质粒pMD19-T-VP60,并进行序列测定.测序正确的pMD19-T-VP60经EcoRⅠ与XhoⅠ双酶切后,将目的片段VP60插入真核表达载体pVAX-1,构建真核表达质粒pVAX1-VP60.将构建好的重组质粒pVAX1 VP60按500μg/只腿部肌肉注射25日龄家兔,同时设pVAX-1组、兔瘟组织灭活苗组和PBS组.分别于免疫后7,14,21,28,35,42 d对各组兔静脉采血,间接ELISA法检测血清中特异性抗体水平,结果显示PBS组和pVAX-1组未检测到特异性抗体,pVAX1-VP60组和兔瘟组织灭活苗组家兔都能产生高水平的特异性抗体,在特异性抗体水平高峰期,2组数据差异不显著(P＞0.05).于免疫后3,7,14,21,28,35,42 d随机剖杀pVAX1-VP60组试验兔3只,取心、肝、脾、肺、肾、腿部肌肉,提取组织DNA,进行PCR检测,结果均检测到目的基因VP60的存在.免疫后28 d以滴度108的RHDV 0.5 mL/只腿部肌肉注射攻毒,pVAX-1组、PBS组、兔瘟组织灭活苗组、pVAX1-VP60组的相对保护率分别为0％,0％,90％,85％,表明pVAX1-VP60具有良好的免疫效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	耿毅	四川农业大学动物医学院	147	1011	16.0	24.0
2	汪开毓	四川农业大学动物医学院	270	2400	27.0	35.0
3	陈成	四川农业大学动物医学院	9	41	5.0	6.0
4	余韬	四川农业大学动物医学院	2	2	1.0	1.0
5	邓梦玲	四川农业大学动物医学院	9	45	4.0	6.0
6	坤清芳	四川农业大学动物医学院	8	24	3.0	4.0
7	鲁忠祥	四川农业大学动物医学院	2	2	1.0	1.0
8	邓钊彬	四川农业大学动物医学院	1	2	1.0	1.0