实时荧光定量 TaqMan-PCR 检测小鼠多瘤病毒方法的建立

• 作者: 伍妙梨 冯胜鹏 尹雪琴 张钰 朱余军 王静 袁文 郭鹏举 饶丹 黄碧洪 黄韧
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠多瘤病毒 实时荧光定量PCR TaqMan探针
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 53-58
• 页数: 6页
• 分类号: R-33
• 字数: 4375字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2015.006.011

摘要

目的：建立一种快速、特异、敏感的小鼠多瘤病毒（ murine polyomavirus， MPyV）荧光定量 TaqMan PCR检测方法，用于MPyV核酸的检测。方法根据GenBank中小鼠多瘤病毒基因组序列设计了一对特异性引物及TaqMan探针，扩增长度为69 bp的片段，通过优化反应体系和反应条件，对构建的重组质粒标准品进行检测，并绘制标准曲线，进行特异性、敏感性和重复性试验。最后用建立的方法对人工感染MPyV的肺脏、脾脏和粪便，及86份小鼠临床样本进行检测，验证在临床应用中的效果。结果所建立的检测方法特异性强，只能在小鼠多瘤病毒DNA中检出荧光信号，检测灵敏度达到100拷贝，批内和批间重复性好，检测结果变异系数（ CV ）均小于1.13％，人工感染MPyV小鼠的肺脏、脾脏和粪便均为阳性，对86份临床样本进行检测，有3份样本呈阳性（阳性率为3.5％）。结论建立的MPyV荧光定量TaqMan-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好，适合用于MPyV临床诊断、日常监测和流行病学调查。