沙眼衣原体主要外膜蛋白21-387的原核表达及其免疫原性

• 作者: 刘巧琼 张丽芳 朱珊丽 林晓云 涂建欣 熊一融 陈韶
• 来源期刊: 温州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 沙眼衣原体 主要外膜蛋白 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 95-99,105
• 页数: 6页
• 分类号: R374.1|R392-33|Q344.13
• 字数: 4863字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-9400.2015.02.004

摘要

目的：探讨沙眼衣原体（Ct）E血清型主要外膜蛋白（MOMP21-387）的原核表达及其免疫原性。方法：利用PCR方法扩增Ct E血清型MOMP第21至第387氨基酸的基因序列，克隆至pET21a（+）原核表达载体构建重组质粒pET21a（+）/MOMP21-387，并进行原核表达和纯化，经SDS-PAGE和Western blot法分析鉴定后，通过BALB/c小鼠免疫检测MOMP21-387蛋白的免疫原性，即通过ELISA法检测小鼠血清IgG和生殖道分泌物IgA抗体反应，乳酸脱氢酶（LDH）法检测其脾细胞的特异性杀伤作用。结果：在原核表达系统成功表达了MOMP21-387融合蛋白，经SDS-PAGE及Western blot法鉴定在相对分子质量（Mr）约44000处出现特异性条带；并经Ni-NTA亲和层析的方法获得了纯化的MOMP21-387融合蛋白，免疫BALB/c小鼠可诱导产生特异性血清IgG抗体和生殖道分泌物IgA抗体，至第6周达到高峰，MOMP21-387组的IgG和IgA抗体较PBS组差异均有统计学意义（P＜0.05）；LDH检测结果显示，MOMP21-387组小鼠脾细胞对靶细胞的杀伤率，在10：1、20：1和40：1和80：1时均明显高于PBS组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：Ct E型MOMP21-387融合蛋白具有良好的免疫原性，为基于MOMP21-387的Ct的ELISA法检测方法的开发和疫苗研究奠定了基础。