山羊源副流感病毒3型JS2013株HN基因的原核表达与抗原性分析

• 作者: 张纹纹 李文良 杨蕾蕾 毛立 江杰元 邓加武 魏建忠
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊 副流感病毒3型 HN基因 原核表达 抗原性分析
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 596-601
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5
• 语种: 中文

摘要

参考GenBank中牛副流感病毒3型(BPIV3)内蒙古09株(NM09)全基因组序列(GenBank登录号:JQ063064),设计了1对特异性引物以扩增山羊源副流感病毒3型(PIV3) JS2013株HN基因部分序列;将扩增到的基因测序后进行同源性分析.同源性分析结果表明,它与已报道的HPIV3、BPIV3 HN基因的序列同源性最高,分别为74.3％、79.8％.进化树分析表明,JS2013株并不属于HPIV3与BPIV3,形成一个独立的分支.将HN基因片段克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得原核重组质粒pET-32a(+)-HN.将重组质粒转化到大肠杆菌BL21 (DE3)感受态菌株中,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE与Western-blot试验分析表明,重组蛋白诱导表达成功,并以包涵体形式存在,大小为46 ku.经Western-blot试验验证,重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备的超免疫血清能够与重组蛋白反应;把病毒接种给MDBK细胞后,间接免疫荧光试验表明重组蛋白的多克隆抗体与病毒产生特异性荧光反应,表明该重组蛋白具有很好的免疫原性和反应原性.本试验结果为山羊源副流感病毒3型感染诊断方法的建立和疫苗的研制奠定了基础.