小鼠MafB基因重组腺病毒载体的构建及其对破骨细胞分化的影响

• 作者: 张健 朱云 杨小中 王正宇 陈婷梅 马涛
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 肌腱膜纤维肉瘤癌基因B型 破骨细胞 重组腺病毒 细胞分化
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 32-38,后插1-后插2
• 页数: 8页
• 分类号: Q782
• 字数: 4743字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20150107

摘要

目的:构建小鼠肌腱膜纤维肉瘤癌基因B型(MafB)基因重组腺病毒表达载体,阐明MafB对小鼠破骨细胞分化的影响.方法:提取小鼠RAW264.7细胞总RNA,逆转录为cDNA,以cDNA为模板PCR获得目的基因MafB,连接入穿梭质粒pAdTrack-CMV,经酶切鉴定正确的穿梭质粒用Pme Ⅰ线性化后转化到含pAdEaspy-1的大肠杆菌BJ5183菌株中,经PacⅠ线性化后,在HEK 293细胞中包装腺病毒Ad-MafB,感染小鼠RAW264.7细胞,实验分为空白对照组、空载体组(Ad-GFP组)和过表达组(Ad-MafB组),经RT-PCR和Western blotting法检测MafB的表达水平,经抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、RT-PCR和Western blotting法观察MafB对小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配体诱导的破骨细胞分化的影响.结果:与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组RAW264.7细胞MafB mRNA表达水平明显升高且蛋白相对表达水平明显增加(P＜0.05);TRAP染色,Ad-MafB组TRAP阳性细胞明显少于空白对照组和Ad-GFP组;与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组TRAP和组织蛋白酶K(CTSK) mRNA表达降低且蛋白相对表达水平显著降低(P＜0.05).结论:成功构建可在小鼠RAW264.7细胞中过表达MafB的重组腺病毒Ad-MafB,证实MafB可抑制破骨细胞的分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张健	重庆医科大学附属第一医院骨科	97	367	10.0	15.0
2	陈婷梅	重庆医科大学教育部临床检验诊断学重点实验室	42	230	7.0	14.0
3	杨小中	重庆医科大学附属第一医院骨科	4	16	1.0	4.0
4	马涛	重庆医科大学附属第一医院骨科	5	3	1.0	1.0
5	朱云	重庆医科大学附属第一医院骨科	5	2	1.0	1.0
6	王正宇	重庆医科大学附属第一医院骨科	4	2	1.0	1.0