重组siRARγ腺病毒构建及其对小鼠肝脏祖细胞分化的影响

• 作者: 何昀 周建武 毕杨 龚梦嘉
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 维甲酸核受体γ 腺病毒载体 小干扰RNA 肝细胞分化
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 22-28
• 页数: 7页
• 分类号: R34
• 字数: 4416字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建并筛选小鼠RARγ基因的siRNA腺病毒载体,并探讨抑制RARγ表达对小鼠肝脏祖细胞分化的影响.方法 设计3对特异性针对小鼠RARγ基因的siRNA序列,体外退火形成双链,与SfiⅠ酶切后的pSES-HUS质粒连接,随后在BJ5183中与pAdEasy-1骨架质粒同源重组获得pAd-siRARγ重组腺病毒质粒,并在HEK293细胞中包装腺病毒Ad-siRARγ.腺病毒感染小鼠肝脏祖细胞HP14.5d,real-time PCR及Western blot检测RARγ的表达,1 μmol/L ATRA诱导肝细胞分化,ALB-Gluc活性及PAS染色检测肝脏细胞分化的状态.结果 PCR、酶切鉴定均证实siRNA正确克隆至腺病毒质粒中,测序结果与设计的siRNA序列一致.腺病毒在HEK293细胞中包装10 d可见红色荧光细胞的云雾状扩增,HP14.5d细胞的48 h腺病毒感染率为60％.其中,Ad-siRARγ2、3可有效抑制小鼠HP14.5d细胞中RARγ的表达(P＜0.05).ATRA可诱导肝细胞分化,ALB-Gluc活性及PAS染色阳性细胞明显高于对照组,Ad-siRARγ2,3可显著抑制ATRA诱导的小鼠HP14.5d细胞的ALB表达和糖原合成能力(P＜0.05).结论 成功构建并筛选出能有效抑制RARγ表达的siRNA腺病毒,感染小鼠肝脏祖细胞HP14.5d能显著抑制ATRA诱导的肝细胞成熟分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何昀	重庆医科大学附属儿童医院儿研所干细胞实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆市干细胞治疗工程技术研究中心	16	42	4.0	5.0
2	龚梦嘉	重庆医科大学附属儿童医院儿研所干细胞实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆市干细胞治疗工程技术研究中心	8	12	2.0	3.0
3	周建武	重庆医科大学附属儿童医院儿研所干细胞实验室儿童发育疾病研究教育部重点实验室重庆市干细胞治疗工程技术研究中心	1	2	1.0	1.0