结核分枝杆菌重组抗原Rv0350的克隆表达和血清学评价

• 作者: 万康林 余琴 刘英杰 林楠 赵平
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Rv0350 酶联免疫吸附试验 受试者工作特征曲线
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1307-1310
• 页数: 4页
• 分类号: R378.91+1
• 语种: 中文

摘要

目的 对结核分枝杆菌重组抗原Rv0350基因进行克隆表达和纯化,并对其抗原性进行评价,分析此种抗原的应用价值.方法 以结核分枝杆菌标准株H37Rv菌株基因组为模板,PCR扩增Rv0350基因片段,产物经验证后与载体质粒pET-32a构建重组质粒,转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)菌株内,蛋白诱导纯化后基于酶联免疫吸附试验(ELISA),使用重组结核抗原Rv0350对183份血清进行检测.运用受试者工作特征曲线法计算抗原的最佳临界值(cut-off值),并计算该抗原的灵敏度、特异度曲线下面积(AUC)和诊断效率,对其诊断能力和应用价值进行综合评价.结果 经PCR扩增后的Rv0350基因片段电泳结果与目的基因相符,抗原诱导表达最佳时间为4h,纯化蛋白与预期结果相同,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果表明,该蛋白的灵敏度为75.3％,特异度为80.0％,诊断效率为77.6％,Yuden指数为0.553,AUC为0.828.结论 结核分枝杆菌重组抗原Rv0350具有良好的诊断灵敏度,有一定的临床应用价值.