人鼠共打靶 ERβ特异性基因沉默载体的构建和鉴定

• 作者: 孙长英 鲁世金
• 来源期刊: 长治医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 载体 靶基因 基因沉默 人 小鼠
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 325-330
• 页数: 6页
• 分类号: R392
• 字数: 4289字
• 语种: 中文

摘要

目的：：构建人和鼠共打靶特异性 ERβ基因沉默慢病毒载体。方法：检索人和小鼠 ERβ基因转录本及其序列,应用 SiRNA Target Finder 软件设计人和小鼠共打靶 ERβ基因沉默 siRNA 和阴性对照siRNA,合成发夹状双链 shRNA,与线性化质粒 PLL3.7连接构建为重组质粒(ERβ-shRNA-PLL3.7和阴性对照质粒 ER-N-shRNA-PLL3.7),经鉴定后,转染人成骨肉瘤细胞 MG63和小鼠成骨细胞株MC3T3-E1,经 Realtime-PCR 和 western blot 法检测重组质粒对目的基因沉默效果。应用 SPSS16.0软件统计分析,检验水准为α=0.05。结果：经测序证明重组质粒中含有目的 shRNA 序列。分别转染小鼠成骨细胞株 MC3T3-E1和人成骨肉瘤细胞 MG63细胞后,无论 Realtime-PCR 检测 ERβ基因表达,还是western blot 法检测蛋白表达,均较空白对照组或阴性对照组显著降低,差异有显著性,P <0.05。结论：成功构建了人和小鼠共同高效打靶的 ERβ基因沉默慢病毒载体质粒,并包装成假病毒颗粒,为利用小鼠作为动物模型研究人基因功能或开发基因药物奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙长英	长治医学院附属和平医院骨科	28	129	7.0	10.0
2	鲁世金	长治医学院附属和平医院骨科	3	14	2.0	3.0