构建IL-4启动子区报告基因载体探讨甲基化对其启动子调控活性的影响

• 作者: 王学民 邹颖 顾军
• 来源期刊: 中华全科医学
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素4 甲基化 报告基因载体
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 全科医学论著
• 页码范围: 1238-1240,1312,封3
• 分类号: R758.2|R446.7
• 语种: 中文

摘要

目的 白细胞介素4(Interleukin-4,IL-4)在特应性皮炎等疾病的发病机制中发挥着关键的作用,但其基因甲基化改变与疾病相关性尚不明确.本研究通过构建荧光素报告基因载体,检测DNA甲基化对于IL-4基因启动子转录活性的影响.方法 以Jurkat细胞基因组DNA为模板,PCR扩增IL-4启动子调控序列片段,连接入克隆载体psiCHECK荧光素报告载体.采用补丁甲基化(patch methylation)技术,在体外对IL-4启动子基因片段进行甲基化处理,构建甲基化IL-4启动子报告基因载体.采用电穿孔转染技术,将psiCHECK-IL-4-promoter荧光素报告载体转染至Jurkat细胞,对甲基化和未甲基化载体的荧光素酶进行检测,比较其对IL-4基因转录水平的影响.结果 琼脂糖凝胶电泳证实获得了IL-4启动子区域基因序列,测序结果与Genbank中一致,成功构建了IL-4启动序列及其甲基化的psiCHECK-IL-4-promoter荧光素酶报告基因载体.经检测,甲基化报告基因载体的转录活性较未甲基化载体明显降低,相对比例为0.43∶1.结论 IL-4启动子序列低甲基化可导致其转录活性升高,上调IL-4表达水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾军	第二军医大学长海医院皮肤科	268	1475	18.0	26.0
2	王学民	上海市皮肤病医院皮肤与化妆品研究室	111	636	13.0	19.0
3	邹颖	第二军医大学长海医院皮肤科	4	9	2.0	2.0