堆型艾美耳球虫ADF基因的原核表达与免疫原性

• 作者: 刘义伟 包永占 吉星煜 张晶 张月 秦建华 赵月兰
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 堆型艾美耳球虫 ADF基因 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 229-234
• 分类号: S852.723
• 语种: 中文

摘要

参考GenBank中收录的E.acervulina ADF基因序列设计1对特异性引物,以河北保定株堆型艾美耳球虫子孢子DNA为模板,用聚合酶链式反应(PCR)法扩增ADF基因.将扩增的ADF基因克隆至pMD18 T载体,转化感受态细胞DH5α,蓝白斑法筛选出阳性重组子,提取阳性质粒进行PCR、酶切鉴定及对序列确证.将扩增产物与原核表达载体pET32a(+)连接,构建重组质粒pET32a ADF,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定.用E.acervulina重组质粒pET32a-ADF免疫雏鸡,观察其对雏鸡细胞免疫和体液免疫功能的影响.结果显示,ADF基因扩增产物为729 bp,与预期结果相符.序列分析结果表明,该株的ADF基因序列与参考序列同源性达99.6％.表达出的ADF重组蛋白相对分子质量大小约为46 000.与健康对照组相比,重组质粒组淋巴细胞的增殖能力明显增强(P＜0.05),外周血中IgG及IL-2含量均显著升高(P＜0.01),表明pET32a ADF质粒DNA能有效提高雏鸡的细胞免疫和体液免疫水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵月兰	河北农业大学动物医学院	60	297	11.0	15.0
2	秦建华	河北农业大学动物医学院	172	899	15.0	20.0
3	张晶	河北农业大学动物医学院	29	58	4.0	6.0
4	包永占	河北农业大学动物医学院	78	473	12.0	16.0
5	吉星煜	河北农业大学动物医学院	4	4	1.0	2.0
6	张月	河北农业大学动物医学院	6	12	3.0	3.0
7	刘义伟	河北农业大学动物科技学院	6	10	2.0	3.0