山羊痘疫苗荧光定量效检方法的建立及应用

• 作者: 唐娜 孙翠萍 张倩 沈志强 王金良 胡琳琳 苗立中
• 来源期刊: 山东农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊痘 疫苗 荧光定量 效力检验
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 页码范围: 865-869
• 页数: 5页
• 分类号: S8
• 字数: 3814字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2324.2015.06.013

摘要

为建立灵敏度高，特异性强的山羊痘（GPV）荧光定量 PCR(FQ-PCR)检测方法，并以稳定的标准品替代定量测定山羊痘疫苗半成品中的核酸。针对山羊痘病毒基因组 P32基因设计一对特异性引物，构建稳定的标准品，进行敏感性、特异性和稳定性试验，并对本单位的部分批次山羊痘疫苗半成品进行定量检验，与 TCID50效检结果相比较寻求相关性。结果表明建立的标准曲线相关系数为0.9995，扩增效率为98%，该方法只扩增山羊痘病毒，不扩增其他病原，能检测到每微升体积中100个 DNA 模板拷贝数，比山羊痘普通 PCR(GPV-nPCR)高一个数量级。制备三批标准品进行重复性试验，结果变异系数在0.43~1.9%之间，稳定性良好。对4批的山羊痘疫苗半成品进行效力检验， TCID50≥104.5/mL 时 Ct 值为14.51。建立的 GPV-FQ-PCR 方法能特异性的检测 GPV 核酸含量，与 TCID50测定的结果具有良好的相关性，可用于山羊痘半成品中核酸的定量测定。