转染突变型α-半乳糖苷酶A基因诱导细胞自噬异常及其作用机制探讨

• 作者: 刘靖 康曼德 张巍 徐春晓 王朝霞 袁云 赵亚雯
• 来源期刊: 中华神经科杂志
• 关键词: 法布里病 α半乳糖苷酶 微管相关蛋白质类 自噬 凋亡调节蛋白质类
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 自噬
• 页码范围: 551-555
• 页数: 5页
• 字数: 4577字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1006-7876.2015.07.003

摘要

目的 研究α-半乳糖苷酶A(GLA)基因突变对细胞自噬水平的影响,并初步探讨其作用机制.方法 选取通过超微病理检查、GLA活性检测和GLA基因突变筛查确诊的两个法布里病家系,分别构建两个家系GLA基因突变型重组表达质粒[pcDNA3.1-GFP-ex1(EX1组),pcDNA3.1-GFP-ex3(EX3组)]及GLA野生型重组表达质粒(pcDNA3.1-GFP-GLA,GLA组),利用脂质体法将重组表达质粒瞬时转染至Hela细胞中培养.对照组为未进行转染的Hela细胞系.利用实时PCR及Western印迹法检测各组自噬基因及自噬途径相关蛋白(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,Beclin-1,P62/ SQSTM1)的表达.结果 EX1组、EX3组、GLA组和对照组LC3半定量值分别为1.495±0.064、1.490±0.020、1.285 ±0.021、1.260±0.042;P62/ SQSTM1半定量值分别为0.555±0.086、0.480±0.084、0.785±0.439、0.980±0.278;Beclin-1 mRNA 2-ΔCt值分别为0.011±0.003、0.008±0.002、0.005±0.001、0.003 ±0.001;Beclin-1蛋白半定量值分别为1.178±0.098、1.209±0.092、0.931±0.100、0.796±0.184.与野生型相比,两组转染突变型GLA组中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平上调(t=5.118、4.984,P=0.007、0.008),多聚泛素结合蛋白P62/ SQSTM1表达水平差异无统计学意义(t=1.052、1.400,P=0.323、0.199),自噬基因Beclin-1 mRNA(t=3.800、2.445,P=0.005、0.040)及蛋白(t=2.424、2.729,P=0.042、0.026)表达水平均上调.结论 突变GLA基因可诱导细胞自噬水平上调,并可能通过Beclin-1依赖性信号通路诱导细胞自噬活化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张巍	北京大学第一医院神经内科	186	1090	17.0	24.0
2	袁云	北京大学第一医院神经内科	294	1498	18.0	22.0
3	王朝霞	北京大学第一医院神经内科	146	835	16.0	19.0
4	刘靖	北京大学第一医院神经内科	148	566	14.0	21.0
5	赵亚雯	北京大学第一医院神经内科	11	16	2.0	3.0
6	徐春晓	北京大学第一医院神经内科	5	14	2.0	3.0
7	康曼德	北京大学第一医院神经内科	2	4	2.0	2.0