猫α-synuclein蛋白的表达纯化及生物学特征分析

• 作者: 倪斌 刘俊平 周健 夏雅琴 张君智 张玲 张金喜 戴一鸣 李坚 李建峰 杨可威 鲁燕华
• 来源期刊: 北京生物医学工程
• 学科: 医学
• 关键词: α-突触核蛋白 猫 帕金森病 克隆 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 458-461,508
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 2793字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-3208.2015.05.04

摘要

目的：对猫突触核蛋白（α?synuclein ）进行克隆、表达及纯化，并探讨其生物信息学特征。方法在Genebank中α?synuclein基因的保守区域内设计引物，从猫脑cDNA文库中PCR扩增得到猫的α?synuclein基因，再将此基因双酶切后克隆到pET28a原核表达载体中，构建重组质粒，测序正确的重组质粒转化BL21（ DE3）大肠杆菌，采用IPTG诱导表达。然后对猫α?synuclein氨基酸的同源性和疏水性进行分析。结果实验成功从猫脑cDNA文库中扩增出α?synuclein基因，基因全长381个碱基，编码126个氨基酸。获得的全长基因成功克隆进入pET28a，最后转染大肠杆菌BL21（ DE3），获得可溶性表达的α?synuclein蛋白质，蛋白质分子量为13?12kD，与预期分子量一致。生物信息学分析显示猫α?synuclein蛋白与人源及鼠源α?synuclein氨基酸具有很高的同源性，分别为87?35％和83?15％，但是与鼠和人的氨基酸序列比较，猫α?synuclein氨基酸缺失41～54位氨基酸。蛋白质结构预测显示猫α?synuclein具有很好的疏水性，有助于诱导表达时形成可溶性蛋白，这一结果在本研究中得到证实。结论本研究首次克隆了猫α?synuclein基因，并在大肠杆菌中实施了可溶性表达，为后期研究α?synuclein的进化、蛋白晶体结构、生物学功能和帕金森动物模型的构建奠定了一定的基础。