腺病毒介导的T细胞高效基因表达系统的构建

• 作者: 刘品一 吕赛群 吴红平 崔磊 李振海 李林芳 金华君 钱其军 黎江
• 来源期刊: 浙江理工大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺病毒 启动子 PD-1 癌症免疫治疗
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 生物与生命科学
• 页码范围: 718-723
• 页数: 6页
• 分类号: Q789
• 字数: 4124字
• 语种: 中文

摘要

结合转基因修饰的手段,能有效提高细胞免疫治疗的疗效,但由于缺乏T细胞高活性表达系统,限制了该方法的应用.构建腺病毒介导的双荧光素酶启动子活性筛选系统,检测一系列常用强启动子(CMV、CMV(in)、CAG、EF1a及CASI)在T细胞株K562及Jurkat中的活性,发现EF1α启动子活性在T细胞株中的活性最高.在EF1a的基础上,增加mCMV增强子和hCMV增强子顺式作用元件,构成了2个新型嵌合型启动子CCEF及CCEF(in).双荧光素酶检测系统检测结果表明,新构建的2个启动子在T细胞中的活性高于EF1α,且两者相比CCEF启动子活性更高(p＜0.05).利用CCEF启动子控制PD-1全长抗体基因,并将此表达框插入腺病毒基因组,构建重组腺病毒Ad-CCEF-anti-PD-1.通过Western blotting及ELISA方法检测病毒感染T细胞株后,抗体基因的表达效率.结果表明,Ad-CCEF-anti-PD-1感染T细胞后,PD-1抗体能在T细胞中正确表达,且表达量较高(K562中11.019μg/mL,Jurkat中9.078 μg/mL),表明该腺病毒介导的T细胞高效的基因表达系统成功构建,具有良好的应用前景.