多抗间接ELISA方法的建立及其在海洋细菌快速检测中的应用

• 作者: 宋晓玲 张晓静 张盛静 职通瑞 黄倢
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 间接ELISA 蜡样芽孢杆菌 溶藻胶弧菌 兔抗血清 对虾
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 71-76
• 页数: 6页
• 分类号: Q522
• 字数: 4821字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11758/yykxjz.20150209

摘要

为了从对虾体内分离出的菌株中快速筛选出蜡样芽孢杆菌和溶藻胶弧菌,将蜡样芽孢杆菌与溶藻胶弧菌作为抗原,免疫SPF新西兰大白兔,获得免疫血清,效价均高于1 : 2000.将免疫兔血清作为一抗,HRP-羊抗兔血清作为二抗,建立了蜡样芽孢杆菌和溶藻胶弧菌快速检测的间接ELISA方法.此方法中,兔抗血清最佳稀释度为1 : 10000,菌液最佳包被浓度为106 CFU/ml;HRP-羊抗兔血清最佳稀释浓度为1 : 1000,可检测细菌最低浓度为104 CFU/ml.抗蜡样芽孢杆菌血清与苏云金芽孢杆菌有交叉反应,抗溶藻胶弧菌血清与其亲缘相近菌株无交叉反应,具有较强的特异性.2012年和2013年,分别从斑节对虾、中国对虾、凡纳滨对虾等 9 批样本中分离纯化到 109 株海洋细菌,利用建立的多抗间接ELISA方法对其中部分菌株进行快速检测,共检测出6株溶藻胶弧菌,未检测出蜡样芽孢杆菌.