红三叶 ISSR-PCR 反应体系的建立与优化

• 作者: 孟丽娟 赵桂琴
• 来源期刊: 草原与草坪
• 学科: 农学
• 关键词: 红三叶 ISSR-PCR 正交优化
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: ? 研 究 报 告 ?
• 页码范围: 21-26
• 页数: 6页
• 分类号: S541|Q75
• 字数: 4878字
• 语种: 中文

摘要

采用正交试验设计,对影响红三叶 ISSR-PCR 反应较大的4个因素(Taq DNA 聚合酶、Mg2+、dNTP 及引物)在4个水平上进行筛选,建立并优化了适合红三叶 ISSR 分析的最佳反应体系。在25μL 反应体系中各反应物的最适含量为40 ng 模板 DNA,10×PCR-buffer 2.5μL,2.5 mmol/L Mg2+,2.5 U Taq DNA 聚合酶,引物1μmol/L,0.2 mmol/L dNTP。反应程序为：94℃预变性5 min；94℃变性30 s,引物退火30 s,72℃延伸1 min,循环35次；72℃延伸7 min,4℃保存。优化体系的建立为采用 ISSR 分子标记技术进行红三叶种质资源遗传多样性分析提供了技术参考。