滇龙胆GrWRKY5基因的克隆和植物表达载体构建

• 作者: 张晓东 李富生 李彩霞 李涛 王元忠 王彩云
• 来源期刊: 广西植物
• 学科: 生物学
• 关键词: 滇龙胆 GrWRKY5 基因克隆 序列分析 植物表达载体构建
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 遗传与育种
• 页码范围: 741-747
• 页数: 7页
• 分类号: Q943.2|Q786
• 字数: 4557字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11931/guihaia.gxzw201312034

摘要

WRKY蛋白是目前被广泛研究的一类DNA 特异结合转录因子,在植物次生代谢物生物合成、植物生长和发育及衰老等生理过程以及生物、非生物防御反应中起重要的调控作用.该研究从滇龙胆幼叶中克隆萜类合成的关键转录因子基因GrWRKY5,并利用生物信息学方法对基因功能进行预测,构建植物过表达载体.结果表明：根据三年生滇龙胆转录组 GrWRKY5基因序列,设计特异性引物,通过 RT-PCR 扩增GrWRKY5 ORF序列,并进行 TA 克隆、测序和序列分析；构建入门载体 pENTRTM2B-GrWRKY5,经 LR 反应后构建植物过表达载体.GrWRKY5 ORF全长591 bp,编码196个氨基酸,GenBank登录号为KF922375,其中第167与170之间的色氨酸(W)、精氨酸(R)、赖氨酸(K)、酪氨酸(Y)组成 WRKY 蛋白所特有的“WRKY”结构.序列分析表明GrWRKY5是 WRKY 超家族的成员.经生物信息学在线软件分析发现, GrWRKY5的等电点为6．29,脂肪族指数为61．37,不稳定指数为57．80.总平均疏水性为-0．708,为亲水蛋白；含有20种氨基酸,其中天冬氨酸(Asp)和脯氨酸(Pro)含量最高,为8．1％；半胱氨酸(Cys)含量最低,仅为1．0％.氨基酸序列系统发育分析表明,GrWRKY5与拟南芥中 WRKY 家族中遗传距离最接近的是WRKY27,属于Ⅱe 类成员；与 CrWRKY22和 VvWRKY22蛋白的亲缘关系较近；与 JcWRKY47和 Tc-WRKY27亲缘关系较远；BLASTp结果显示,GrWRKY5与欧洲油菜BnWRKY27-1的同源性最高(为69％)；与拟南芥AaWRKY22的一致性最低(仅为31％).以Gateway入门载体pENTR2B和目的载体 pK2GW7为基础,成功构建了植物过表达载体pK2-35S-GrWRKY5,该载体的成功构建为该基因在拟南芥、滇龙胆等植物中的遗传转化奠定了基础,同时为WRKY基因功能的深入研究提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王元忠	云南省农业科学院药用植物研究所	162	905	14.0	19.0
2	李涛	玉溪师范学院资源环境学院	70	340	10.0	12.0
3	李富生	云南农业大学农学与生物技术学院	84	686	15.0	23.0
4	王彩云	云南农业大学农学与生物技术学院	5	28	3.0	5.0
6	张晓东	玉溪师范学院资源环境学院	31	71	5.0	7.0
7	李彩霞	玉溪师范学院资源环境学院	19	43	4.0	6.0