鸡IL-5基因在毕赤酵母中的表达及重组蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘一尘 刘莎莎 张俊峰 张健康 张春杰 程相朝 郁川 陈松彪 颜云飞
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡白介素5 pPICZαA表达载体 毕赤酵母 间接酶联免疫吸附试验
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 854-860
• 页数: 7页
• 分类号: S852.43
• 语种: 中文

摘要

参照GenBank中登录的鸡白介素5(IL-5)基因的核苷酸序列,设计1对特异性引物.用聚合酶链反应(PCR)以克隆载体pMD18-T-IL-5为模板扩增IL-5基因,然后将IL-5基因克隆到酵母表达载体pPICZaA中并电转化入酵母X-33,在Zeocin作为筛选标记的YPD培养基上筛选阳性菌落.经甲醇诱导表达鸡IL-5蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-bolt分析.以纯化的鸡白介素5蛋白作为包被抗原,建立了检测鸡白介素5蛋白抗体的间接ELISA.结果显示,鸡白介素5基因获得成功表达,诱导表达培养物上清中表达出具有反应活性的26 ku左右的重组鸡白介素5蛋白.从而实现了鸡白介素5蛋白高效的酵母表达.确定了间接ELISA的最佳反应条件:抗原包被浓度为10.00 μg/mL,包被时间为37℃2h,血清稀释度为1∶1 600,HRP标记的山羊抗小鼠IgG抗体的稀释度为1∶1 000,血清与抗原在37℃反应1h,血清和二抗于37℃反应1h.应用该方法对试验小鼠血清进行检测,结果显示建立的ELISA具有较好的重复性,适用于检测抗鸡白介素5蛋白的抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张春杰		6	0	0.0	0.0
2	陈松彪		4	0	0.0	0.0
3	程相朝		6	0	0.0	0.0
4	郁川		5	0	0.0	0.0
5	颜云飞		2	0	0.0	0.0
6	刘一尘		1	0	0.0	0.0
7	张俊峰		2	0	0.0	0.0
8	刘莎莎		1	0	0.0	0.0
9	张健康		1	0	0.0	0.0