胸膜肺炎放线杆菌复合减毒突变株WF83△apxⅡC/apxⅠAN/apxⅠAC的构建

• 作者: 伍锐 张倩 文心田 文翼平 曹三杰 陈广力 黄小波
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 胸膜肺炎放线杆菌 基因缺失 毒素Ⅱ激活基因C(apxⅡC) 毒素Ⅰ结构基因A氮端序列(apxⅠAN) 毒素Ⅰ结构基因A碳端序列(apxⅠAC)
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 841-850
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.07.001

摘要

猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是猪(Susscrofa)的一种接触性呼吸道疾病,引起该病的致病菌是胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP),目前该病己成为世界养猪业的五大疫病之一,造成了重大的经济损失.为了提供一种能够保护多种血清型的安全性弱毒疫苗,本研究以APP血清7型菌株WF83 (APP-7-WF83)为基本材料,将卡那霉素抗性基因(Kan)作为抗性筛选基因置换完整的溶血外毒素(Actinobacillus pleuropneumoniae RTX-toxin,Apx)家族中的的毒素Ⅱ激活基因C(apxⅡC),同时引入APP血清1型菌株(shope4074)的毒素Ⅰ基因的氮端(apxⅠ AN)和碳端(apxⅠ AC)片段序列,构建重组转移载体pBSLNKAR,电转化将该载体导入亲本菌株APP-7-WF83,获得突变株WF83△apxⅡC/apxⅠ AN/apxⅠ AC.与亲本株(APP-7-WF83)相比,溶血活性检测显示,突变株WF83△apx ⅡC/apxⅠ AN/apxⅠ AC无溶血性;PCR鉴定显示,WF83 △apxⅡC/apxⅠ AN/apxⅠ AC缺失了377 bp的apxⅡC,同时插入1 188 bp的apxⅠ AN序列和377 bp的apxⅠ AC序列;以0.5 mL的胰蛋白胨大豆肉汤(trypticase soy broth,TSB)为空白对照,亲本株APP-7-WF83组和突变株WF83 △apxⅡC/apxⅠ AN/apxⅠ AC组均以1.1×109cfu/mL的量接种小鼠(Mus musculus)后,亲本株组小鼠全部死亡,突变株组小鼠没有死亡情况,证实突变株的毒性显著减弱.本研究成功构建了基因缺失复合减毒株WF83△apxⅡC/apxⅠ AN/apxⅠAC,为进一步研究基因缺失弱毒疫苗提供了基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	文心田	四川农业大学动物医学院猪病研究中心	100	612	14.0	19.0
2	曹三杰	四川农业大学动物医学院猪病研究中心	89	524	12.0	17.0
3	黄小波	四川农业大学动物医学院猪病研究中心	52	188	9.0	11.0
4	伍锐	四川农业大学动物医学院猪病研究中心	13	6	1.0	2.0
5	文翼平	四川农业大学动物医学院猪病研究中心	16	32	3.0	5.0
6	张倩	四川农业大学动物医学院猪病研究中心	12	91	6.0	9.0
7	陈广力	四川农业大学动物医学院猪病研究中心	1	1	1.0	1.0