羊布鲁杆菌脂蛋白 OM P19单克隆抗体制备与鉴定

• 作者: 吴静波 廖卿宇 王文敬 罗佩芳 胡飞环 黎诚耀
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 布鲁杆菌 OMP19 蛋白表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 899-902,913
• 页数: 5页
• 分类号: R378.5
• 字数: 3611字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2015.10.001

摘要

目的：制备与鉴定羊布鲁杆菌脂蛋白OM P19单克隆抗体，用于布菌感染免疫机制研究。方法将OM P19基因连接入pET‐30a（＋）表达载体中，构建pET‐30a（＋）／OMP19质粒，转化入大肠埃希氏菌BL21（E3），以不同浓度异丙基‐β‐D硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达，采用镍金属螯合亲和层析（NI‐NTA）纯化；以布菌阳性血清检测重组蛋白免疫反应性，并利用杂交瘤技术制备单克隆抗体，以天然OM P19蛋白及布菌外膜蛋白提取物（NM P）对制备的单克隆抗体进行Western Blot及酶免疫染色试验（IEST）鉴定。结果表达了OMP19蛋白，分子量约19 kDa ，通过纯化纯度可达95％，Western Blot分析显示蛋白具有良好的抗原性，并制备了OM P19抗原23株鼠源性单克隆抗体，鉴定结果显示22（95．65％）株能与天然OM P19蛋白反应，18（78．26％）株能与NM P反应，其中IgG1（k）亚型占91．30％；4株能与羊种布鲁氏菌菌涂片反应。结论成功制备具有良好抗原性的重组OM P19蛋白，筛选出识别天然蛋白的单克隆抗体，已初步应用于布菌的检测，为OM P19抗原B细胞表位的筛选奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王文敬	南方医科大学生物技术学院输血医学系	47	192	7.0	11.0
2	黎诚耀	南方医科大学生物技术学院输血医学系	36	184	8.0	11.0
3	廖卿宇	南方医科大学生物技术学院输血医学系	1	3	1.0	1.0
4	胡飞环	南方医科大学生物技术学院输血医学系	5	12	3.0	3.0
5	吴静波	韶关学院英东生命科学学院	14	23	3.0	3.0
6	罗佩芳	南方医科大学生物技术学院输血医学系	3	6	2.0	2.0