牡蛎疱疹病毒魁蚶株交叉引物等温扩增检测方法的建立及初步应用

• 作者: 尹伟力 岳志芹 张盛静 王崇明 白昌明 蔡生力 赵小金 黄倢
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 魁蚶 牡蛎疱疹病毒魁蚶株 交叉引物等温扩增 检测
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 页码范围: 580-588
• 分类号: S917.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20141109582

摘要

为建立牡蛎疱疹病毒魁蚶株快速、灵敏、准确和操作简便的检测方法,实验根据已测序完成的OsHV-1-SB全基因组序列,选择其保守区域,建立了交叉引物等温扩增检测方法,并对反应温度、dNTPs、Mg2+浓度和反应时间进行了优化.结果显示,最佳温度为63℃,反应时间为60 min,dNTPs浓度为1.4 mmol/L,Mg2+浓度为6 mmol/L.该方法检测灵敏度为30拷贝的质粒DNA,并且特异性较强,与贝类常见病原急性病毒性坏死病毒、鲍鱼疱疹病毒、派琴虫、包纳米虫、马尔泰虫以及对虾白斑综合征病毒和副溶血弧菌均无交叉反应.使用实验建立的CPA检测方法对2012年分别采自韩国庆尚南道、山东长岛、辽宁大连共计22份OsHV-1-SB感染情况未知的魁蚶样品进行了检测.研究表明,实验所建立的OsHV-1-SB的CPA检测方法简单、快速、灵敏且特异性强.由于其检测结果可通过简单离心或者向反应管中加入核酸荧光染料GeneFinderTM进行肉眼观察,所以可以在沿海贝类养殖厂及条件简陋的实验室使用,具有较好的应用前景.