四川白鹅CD4基因胞外去信号肽区的可溶性表达及纯化

• 作者: 汪铭书 程安春 程蓓蓓 陈舜
• 来源期刊: 四川动物
• 学科: 生物学
• 关键词: 四川白鹅 CD4 原核表达 可溶性蛋白
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 基础资料
• 页码范围: 875-879
• 页数: 5页
• 分类号: Q959.7|Q78
• 字数: 4339字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11984/j.issn.1000-7083.20150121

摘要

根据GenBank公布的四川白鹅T细胞表面分子CD4基因序列设计特异性引物,扩增其胞外去信号肽区基因,将其构建成原核重组表达质粒goCD4-pET-32a(+),并在大肠杆菌原核表达系统中进行可溶性表达并纯化,为进一步应用与研究提供基础.通过从成年四川白鹅胸腺组织中提取RNA,经反转录合成cDNA为模板扩增CD4基因胞外去信号肽区,并构建原核表达载体goCD4-pET-32a(+).在大肠杆菌Rosetta(DE3)pLysS系统中进行原核表达,通过改变表达温度、培养基、诱导剂IPTG浓度、诱导时间以及抗性浓度等条件,最终获得可溶性表达并经NI-NTA亲和层析获得纯化蛋白.结果显示,鹅CD4胞外区蛋白只有在16℃的TB培养基中目的蛋白his-goCD4可表达,鉴定结果与预期相符,诱导表达成功且多以不可溶的包涵体形式存在.研究发现改变IPTG浓度对表达产物存在形式影响较大,最终筛选出以0.4 mM的IPTG条件作为可溶性表达的最佳诱导浓度.NI-NTA亲和层析获得纯化蛋白并经Western-blot验证.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程安春		128	1214	19.0	30.0
2	汪铭书	四川农业大学动物医学院预防兽医研究所	97	986	18.0	28.0
11	陈舜	四川农业大学动物医学院预防兽医研究所	10	9	2.0	3.0
20	程蓓蓓	四川农业大学动物医学院预防兽医研究所	1	3	1.0	1.0