一种基于M基因的尼帕病毒TaqMan-MGB荧光RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 张俊哲 柴明骏 王乃福 王建华 王玉玲 肖妍 董志珍 赵丹 赵祥平
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 尼帕病毒 M基因 TaqMan-MGB探针 实时荧光RT-PCR
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1277-1282
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2015.12.012

摘要

为建立一种快速、敏感和特异地检测尼帕病毒(Nipah virus,NiV)的方法,根据NiV M基因序列保守区设计了1对特异性引物和探针,通过优化反应条件,建立了一种检测NiV的TaqMan-MGB实时荧光RT-PCR方法,并对该方法进行特异性、定量线性范围、敏感性和重复性等试验.结果显示,该方法仅对NiVM基因的RNA标准对照(NiV-M-RNA)发生特异性扩增反应,对猪的其他常见病毒,包括经典猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪流感病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型均不发生交叉反应.该方法对NiV-M-RNA的最适线性检测范围为4.6×101～4.6×107 copies/μtL,标准曲线方程为y=-3.418x+37.57,线性相关系数(,2)为0.999,检测下限为4.6 copies/μL.对5个不同浓度(4.6×103～4.6×107 copies/tL)的NiV-M-RNA进行双份样品的4次重复检测,每个浓度重复试验的Ct值的变异系数均小于1.5％,具有良好的重现性.用该方法对368份临床样品进行NiV检测,结果均为阴性.本方法的建立为活猪临床样品中NiV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王建华		15	35	3.0	5.0
2	赵祥平		25	80	6.0	8.0
3	董志珍		23	81	6.0	8.0
4	王玉玲		17	7	2.0	2.0
5	张俊哲		5	2	1.0	1.0
6	赵丹		6	1	1.0	1.0
7	王乃福		15	40	3.0	6.0
8	肖妍		14	39	4.0	6.0
9	柴明骏		1	0	0.0	0.0