肠出血性大肠杆菌O157∶H7Ⅲ型分泌系统效应蛋白NleF基因敲除菌株的构建及其生物学功能初探

• 作者: 周围 宋婷 岳俊杰 徐婷婷 戴红梅 梁龙
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌 O157∶H7 NleF 基因敲除 T3SS λ-Red同源重组
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 747-750
• 页数: 4页
• 分类号: R378.2
• 字数: 3801字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2015.10.004

摘要

目的：构建肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）O157∶H7 T3SS效应蛋白NleF敲除菌株和回复菌株，研究其对细菌生长和细胞死亡的影响。方法利用λ-Red同源重组的方法构建nleF基因敲除菌株ΔnleF；将pET-24a（＋）-NleF重组质粒导入敲除菌感受态细胞中构建回复菌株ΔnleF／NleF。将野生株、敲除株和回复株分别用LB和DMEM（10％FBS）培养，每隔1 h测定D600，绘制生长曲线；分别用3种菌株感染HeLa细胞，用细胞毒性试剂盒检测上清中乳酸脱氢酶（ LDH）的释放量，计算细胞毒性。结果成功构建NleF敲除菌株ΔnleF和回复菌株ΔnleF／NleF；野生株、敲除株和回复株三者的生长速率无明显差异；与野生株相比，ΔnleF感染HeLa细胞后，细胞毒性增加，ΔnleF／NleF感染后HeLa细胞毒性与野生株相当。结论 EHEC O157∶H7 T3SS 效应蛋白NleF对细菌的生长无明显影响，但可能抑制由细菌感染引起的宿主细胞死亡。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	岳俊杰	军事医学科学院生物工程研究所	26	108	6.0	9.0
2	梁龙	军事医学科学院生物工程研究所	33	293	8.0	16.0
3	徐婷婷	安徽大学生命科学学院	14	8	2.0	2.0
5	戴红梅	军事医学科学院生物工程研究所	19	88	6.0	8.0
6	宋婷	军事医学科学院生物工程研究所	4	11	2.0	3.0
7	周围	军事医学科学院生物工程研究所	11	28	4.0	4.0