小鼠抑制素α亚基在杆状病毒表达系统中的表达和纯化

• 作者: 丁明星 刘东明 李悦 胡长敏 陈伟贞 陈建国 韩丽
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 医学
• 关键词: 抑制素α亚基 杆状病毒表达系统 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 1295-1299
• 页数: 5页
• 分类号: R979.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2015.12.015

摘要

为利用杆状病毒表达系统表达小鼠的抑制素α亚基基因(INHα),将模板质粒pcDNA3.1(+)-INHα中的INHα基因克隆至载体质粒pFastBac1中,构建出重组转座质粒pFastBac1-INHα,转化至感受态DH10Bac细胞,形成重组穿梭质粒Bacmid-INHα,转染至Sf9细胞,获得第一代重组杆状病毒(P1).然后病毒连续传代2次,用RT-PCR鉴定重组的杆状病毒,用SDS-PAGE验证纯化后蛋白质的表达,并使用BCA蛋白质浓度检测试剂盒检测纯化后的蛋白质样品的质量浓度.结果表明,感染重组杆状病毒后的Sf9细胞能够明显看到细胞皱缩、碎裂等感染症状;RT-PCR能够扩增出1 272 bp的条带,证明重组的杆状病毒构建正确;SDS-PAGE结果表明重组的杆状病毒能够表达出45 ku的条带,与理论大小一致;利用BCA蛋白质浓度检测试剂盒测得纯化样品中蛋白质的质量浓度为(216.05±10.02) μg/mL.小鼠抑制素α亚基成功地在杆状病毒表达系统中被表达,为今后抑制素的广泛应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡长敏		53	218	9.0	11.0
2	陈建国		22	73	5.0	7.0
3	丁明星		46	266	9.0	14.0
4	刘东明		17	44	4.0	6.0
5	韩丽		14	60	4.0	7.0
6	李悦		1	0	0.0	0.0
7	陈伟贞		1	0	0.0	0.0