沙门菌PCR-ELISA检测方法的建立

• 作者: 李井涛 王佳凤 董少晨 韩来辉
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 沙门菌 聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 540-543
• 分类号: R378.2+2|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 建立沙门菌PCR-ELISA检测方法,并进行验证.方法 根据沙门菌invA基因设计PCR-ELISA引物及探针,进行PCR扩增、核酸杂交及ELISA检测,对变性反应条件、杂交探针浓度、杂交时间和温度及显色时间进行优化,确定阴性、阳性判定的阈值,并进行敏感性、特异性及重复性验证.用建立的PCR-ELISA方法检测人工染菌的22批中药丸剂及27批液体乳中的沙门菌,并与PCR及GB4789方法进行比较.结果 150 mmol/L NaOH变性液可使核酸变性最彻底,50 pmol/ml地高辛标记探针为最适浓度,50℃60 min为最佳杂交时间和温度,最佳显色时间为50 min;阴性、阳性的阈值为0.265.该方法最低检测限为0.5 pg/μl,灵敏度高;能针对性地扩增沙门菌的特异性片段,检测特异性强;检测结果的批内、批间变异系数均小于10％,重复性较好.人工染菌的22批中药丸剂和27批液体乳的PCR-ELISA方法检测阳性率明显高于PCR法,与GB4789方法检测阳性率基本一致.结论 优化后的PCR-ELISA方法特异性强,灵敏度高,重复性好,可快速检测食品、药品中的沙门菌.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李井涛		16	44	5.0	6.0
2	王佳凤		8	14	2.0	3.0
3	韩来辉		2	3	1.0	1.0
4	董少晨		1	2	1.0	1.0