H6N1亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 刘加波 曾婷婷 罗思思 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲 黄莉
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 H6N1亚型 三重RT-PCR
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 1626-1630
• 分类号: S852.659
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2015.10.11

摘要

根据GenBank中H6亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因、N1亚型AIV的NA基因和所有亚型AIV的M基因序列,分别设计并筛选出3对特异性引物,优化引物之间的浓度,建立了H6N1亚型AIV三重RT-PCR检测方法.对该法进行特异性、敏感性和临床样品检测.结果显示,所建立的方法对H6N1亚型AIV可特异性扩增出447(H6亚型AIV)、325(N1亚型AIV)和669 bp(AIV)目的条带,对H6亚型AIV扩增出447、669 bp目的条带,对N1亚型AIV扩增出325、669 bp目的条带,对其他亚型AIV仅扩增出669 bp目的条带,对常见禽病病原体均未扩增出任何条带;该法对H6N1亚型AIV检测下限为0.1 pg;305份临床样品检测结果与病毒分离鉴定一致.本研究所建立的H6N1亚型AIV三重RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高,可同时快速鉴别检测H6、N1亚型AIV和所有亚型AIV,为H6N1亚型AIV的检测提供1种简便、快速和有效的方法.