胃癌研究中实时定量PCR实验内参基因的选择

• 作者: 冯佳 冯强 单保恩 戴素丽 李燕 贾楠 赵连梅
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: 胃癌组织 胃癌细胞 实时定量PCR 内参基因 18sRNA
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 974-978
• 分类号: R331
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2015.10.005

摘要

目的 寻找胃癌研究中较为恒定和适宜作为内参基因.方法 选取50例术后胃癌组织和癌旁组织,1株胃正常上皮细胞株和6株胃癌细胞株,分别提取组织和细胞总RNA.qRT-PCR(real time quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction)实时定量方法检测内参基因GAPDH(Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)、ACTB([-actin)、RPⅡ(RNA polymerase subunit Ⅱ)和18sRNA在上述两组样本中的表达量,对比四种基因表达的变化.选择肿瘤标志物癌胚抗原CEA(carcino-embryonic antigen)作为待测目的基因,分别用上述4种基因作为内参,用相对定量qRT-PCR的方法在上述组织和细胞中检测CEA的表达.使用geNorm软件分析最优化的内参基因.结果 与癌旁组织相比,对应癌组织中GAPDH、ACTB、RPⅡ的表达均发生明显表达上调(P＜0.05),上调倍数分别约为(6.49±1.12)、(5.02±0.87)和(3.68±0.78)倍.而18sRNA在两种组织中未发生明显表达变化(P＞0.05).GAPDH、ACTB、RPⅡ和18sRNA在胃正常上皮细胞和胃癌细胞中表达水平未发生明显变化.用GAPDH、ACTB、RPⅡ作为内参基因时,CEAmRNA上升的倍数和比率均明显减小(P＜0.05).用18sRNA作为内参时,CEA在癌组织中表达明显上升,上升倍数为(2.87±0.56)倍,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在各种组织和细胞中没有完全恒定的内参基因.18sRNA可作为qRT-PCR实验检测胃组织基因表达最适宜的内参基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	单保恩	河北医科大学第四医院科研中心	390	3712	26.0	43.0
2	冯强	中国医学科学院肿瘤医院胸外科	21	128	7.0	11.0
3	赵连梅	河北医科大学第四医院科研中心	55	452	13.0	18.0
4	贾楠	河北医科大学第四医院科研中心	33	105	6.0	8.0
5	李燕	河北医科大学第四医院科研中心	29	216	10.0	13.0
6	戴素丽	河北医科大学第四医院科研中心	6	17	3.0	4.0
7	冯佳	白求恩国际和平医院胃肠科	5	21	3.0	4.0