Mcl-1短发夹RNA在Raw264.7细胞内特异性的筛选

• 作者: 吴江东 吴芳 张万江 张雨晴 曹旭东 王婵 王新敏 王飞雨 章乐
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Mcl-1 RNA干扰 Raw264.7
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 151-155
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 3485字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2015.02.002

摘要

目的：将Mcl-1shRNA转染到Raw264.7细胞内，针对shRNA对小鼠Raw264.7巨噬细胞系中Mcl-1表达的影响，筛选出沉默Mcl-1基因效果最明显的特异性shRNA真核表达质粒。方法：将特异性shRNA经脂质体介导转染小鼠巨噬细胞系Raw264.7；半定量RT-PCR和Western blot分别检测转染24、48 h后Mcl-1 mRNA水平变化和Mcl-1蛋白表达情况，分析对应不同位点的三对特异性shRNA片段对Mcl-1的沉默效果。结果：特异性shRNA片段在24、48 h均能有效降低Mcl-1 mRNA和蛋白水平，沉默效率高于正常组、脂质体组和阴性对照组，差异具有统计学意义（ P＜0.05）；对应不同位点的三对shRNA真核表达质粒，其中Mcl-1 shRNA3对Mcl-1 mRNA和蛋白的抑制作用均最强。结论：RNA干扰技术可有效下调小鼠Raw264.7巨噬细胞系中Mcl-1 mRNA水平，明显下调Mcl-1蛋白表达。成功筛选出了沉默Mcl-1基因效果最明显的特异性shRNA真核表达质粒。