共表达NEP1-40和PRP-1多顺反子重组scAAV的构建

• 作者: 杨兴春 柏宏亮 王瑞 白转丽
• 来源期刊: 陕西医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 富含脯氨酸多肽 NEP1-40 口蹄疫病毒 多顺反子载体 自互补型腺相关病毒
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 页码范围: 263-267
• 页数: 5页
• 分类号: R392.3
• 字数: 4373字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7377.2015.03.002

摘要

目的：构建共表达NEP1‐40和PRP‐1多顺反子重组双链腺相关病毒（scAAV）。方法：PCR扩增NEP1‐40、PRP‐1及FMDV2A的cDNA，建立NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1嵌合肽cDNA。两端加入Flag肽和6×His肽后合成融合基因cDNA，克隆到PES载体构建出重组质粒PES／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1。双酶切重组质粒PBV220‐NT4‐NAP和PES／NEP1‐40‐FM‐DV2A‐PRP‐1，连接得到重组质粒pBV220‐NT4／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1。以腺相关病毒pSS‐CMV构建双链腺相关病毒穿梭质粒ssAAVpSSHG‐NT4／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1。经细胞内同源重组得到共表达NEP1‐40和PRP‐1的重组双链腺相关病毒scAAVpSSHG‐NT4／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1。测定病毒滴度并利用鸡胚背根神经节检测其生物活性。结果：克隆了共表达NEP1‐40和PRP‐1的多顺反子融合基因cDNA，基因测序及核苷酸序列同源性比较结果与设计序列一致；构建了重组质粒pBV220‐NT4／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1，酶切鉴定、核酸序列测定结果与理论值一致；重组的双链腺相关病毒scAAVpSSHG‐NT4／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1应用于鸡胚背根神经节显示明显促进神经突起生长。结论：成功构建了共表达NEP1‐40和PRP‐1的重组双链腺相关病毒scAAVp SSHG‐NT4／NEP1‐40‐FMDV2A‐PRP‐1，并显示出促进鸡胚背根神经节神经突起生长作用。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王瑞	西安交通大学医学院第一附属医院烧伤整形科	74	501	12.0	19.0
2	柏宏亮	西安交通大学医学院第一附属医院烧伤整形科	20	98	5.0	9.0
3	白转丽	西安交通大学医学院第一附属医院烧伤整形科	25	83	5.0	7.0
4	杨兴春	西安交通大学医学院第一附属医院烧伤整形科	1	0	0.0	0.0