慢病毒载体介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞和基质细胞的实验研究

• 作者: 于健 刘晶 刘琼 杨娟 梁伟怡 白浪 苏亚茹
• 来源期刊: 眼科新进展
• 关键词: 慢病毒载体 基因转染 角膜细胞 TLR2
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1101-1104
• 页数: 4页
• 字数: 3938字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13389/j.cnki.rao.2015.0302

摘要

目的 观察慢病毒载体(lentiviral vector,LV)介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞(corneal epithelial cell,CEC)和基质细胞(corneal stromal cell,CSC)的有效性和安全性.方法 分别培养大鼠CEC和CSC,转染组用携带绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)和TLR2小干扰RNA (small interference RNA,siRNA)的LV转染,空白对照组加入空白培养液,阴性对照组加入不携带目的基因的LV.转染组按最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别为10、50、100、200加入LV-TLR2-siRNA-eGFP,选择eGFP表达最强的MOI进行后续实验,观察细胞形态,CCK8检测细胞增殖情况.流式细胞仪检测两种角膜细胞的转染效率,RT-PCR检测转染后TLR2 mRNA的表达情况.结果 MOI=200时转染CEC和CSC荧光表达最高,和空白对照组相比细胞形态未发生明显改变;CCK8结果显示转染组与空白对照组、阴性对照组的IOD值差异均无统计学意义(均为P＞0.05);流式细胞仪检测CEC和CSC转染效率分别为77.600％±1.100％和76.300％±1.387％,和阴性对照组相比差异均有显著统计学意义(均为P＜0.001).RT-PCR检测转染后CEC和CSC TLR2mRNA相对表达量均较对照组明显下降,差异均有显著统计学意义(均为P＜0.001).结论 LV-TLR2-siRNA-eGFP可在体外稳定有效转染CEC和CSC,且对细胞安全性无影响,可有效下调TLR2 mRNA的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨娟	南方医科大学南方医院眼科	21	36	3.0	4.0
2	刘琼	南方医科大学南方医院眼科	21	73	5.0	7.0
3	于健	南方医科大学南方医院眼科	36	141	5.0	10.0
4	梁伟怡	南方医科大学南方医院眼科	4	13	3.0	3.0
5	白浪	南方医科大学南方医院眼科	25	70	4.0	6.0
6	刘晶	南方医科大学南方医院眼科	4	8	2.0	2.0
7	苏亚茹	南方医科大学南方医院眼科	5	29	2.0	5.0