2种猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及比较

• 作者: 何孔旺 倪艳秀 周忠涛 汪伟 温立斌 王小敏 茅爱华
• 来源期刊: 农业科学与技术（英文版）
• 关键词: 猪圆环病毒2型 TaqMan荧光定量 ORF1 ORF2 类猪圆环病毒因子 P1
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 页码范围: 3-8
• 页数: 6页
• 字数: 1313字
• 语种: 英文

摘要

[目的]实现在体外对猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV2）的定量检测。[方法]设计合成2组特异性引物和 TaqMan探针，构建分别包含 PCV2 ORF1和 ORF2基因全长的重组质粒作为标准品，经过反应体系和反应条件的优化，绘制标准曲线，建立2种检测PCV2的分别基于 PCV2 ORF1和 ORF2的TaqMan荧光定量PCR方法。[结果]所建立的2条标准曲线的 Ct值与模板拷贝数的对数之间具有良好的线性关系，相关系数 R均在0.99以上，扩增效率均在90%~110%；重复性好，组内变异系数均小于5%；特异性强，以猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）为模板时均无扩增；敏感性高，ORF1方法可达1.0×101 copies/μl，ORF2方法可达1.0×102 copies/μl。用建立的2种荧光定量PCR方法分别对80份临床样品进行检测并对结果进行比较，结果表明，其中72份临床样品的定量结果数量级基本一致，有8份临床样品的定量结果数量级不一致。利用 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法对8份样品进行了检测，证明这8份样品中确实存在 P1的感染。[结论]基于ORF1建立的定量检测方法更为准确，可用于PCV2的快速诊断和定量检测。