促血管生成素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 李天寿 李桥川 杨鹏程 聂胤超 苏丽华
• 来源期刊: 广西医学
• 学科: 医学
• 关键词: 促血管生成素-1 腺病毒 基因重组 载体 构建 鉴定 小鼠
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论著? 基础研究
• 页码范围: 140-142,145
• 页数: 4页
• 分类号: R784
• 字数: 3265字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11675/j.issn.0253-4304.2015.02.02

摘要

目的：构建携带小鼠促血管生成素-1（ Ang-1）基因的重组腺病毒载体并鉴定。方法化学合成小鼠 Ang-1基因经PCR扩增后亚克隆至穿梭质粒，重组质粒转化感受态细胞，所得转化子经PCR电泳分析并测序鉴定，携带外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带腺病毒大部分基因组的辅助包装质粒共转染人胚肾细胞系HEK 293细胞，反复冻融获取重组腺病毒，终点稀释法测定重组腺病毒滴度，所得腺病毒转染293T细胞48 h收集培养上清，通过 Western Blot分析Ang-1蛋白的表达。结果 PCR产物电泳分析可见大小约1．5 kbp的特征性条带，测序结果显示基因序列与GenBank提供的Ang-1序列一致，经HEK293细胞包装后腺病毒滴度为1×109 pfu／ml，转染293T细胞后培养上清Western Blot分析可见大小58 kD特征性条带，即转染后能分泌正确大小的重组Ang-1蛋白。结论 Ang-1基因重组腺病毒载体可成功构建，为进一步研究Ang-1蛋白对造血干细胞动员及血管新生的作用提供实验依据。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李桥川	广西医科大学第一附属医院血液内科	33	55	4.0	6.0
2	杨鹏程	广西医科大学第一附属医院血液内科	3	2	1.0	1.0
3	聂胤超	广西医科大学第一附属医院血液内科	3	8	2.0	2.0
4	李天寿	广西医科大学第一附属医院血液内科	2	8	2.0	2.0
5	苏丽华	广西医科大学第一附属医院血液内科	2	2	1.0	1.0