EMA-RTQ-PCR快速鉴别沙门菌死活细胞方法的建立

• 作者: 余倩 余秋阳 刘祥 尚静晔 欧阳效鹏
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 叠氮溴化乙锭(EMA) 实时荧光聚合酶链反应(RTQ-PCR) 沙门菌 活细胞
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用
• 页码范围: 2226-2229
• 分类号: R319
• 语种: 中文

摘要

目的 利用EMA (Ethidium Monoazide)能选择性与死细胞DNA非可逆共价结合的特性,建立EMA-RTQ-PCR方法快速鉴别沙门菌死活细胞.方法 选择300μl、3.3×108 CFU/ml沙门菌灭活条件;检测RTQ-PCR的灵敏度与特异性;选择能抑制3.3×1o8 CFU/ml死细胞DNA扩增的EMA浓度,观察该浓度EMA对活菌扩增的影响.结果 灭活条件为65℃、10 min;RTQ-PCR检测沙门菌的灵敏度为25 CFU,特异性好;30 μg/ml的EMA可抑制3.3×108 CFU沙门菌死细胞DNA的扩增;30 μg/ml的EMA对活菌扩增的影响可通过离心消除;活菌数/死菌数≥40％时,可以检出活菌;当活菌数量足够大时,死菌的存在不影响实验结果.结论 本研究建立的快速鉴别沙门菌死活细胞EMA-RTQ-PCR方法可行,能有效避免单纯PCR检测沙门菌产生的假阳性结果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘祥		11	137	5.0	11.0
2	欧阳效鹏		2	7	1.0	2.0
3	尚静晔		2	7	1.0	2.0