转录激活因子样效应物核酸酶介导的山羊β-乳球蛋白基因敲除和人乳铁蛋白基因定点整合

• 作者: 宋绍征 徐晟 成勇 朱孟敏 梅珺琰 荣耀 袁玉国 陈思
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: TALENs 人乳铁蛋白 BLG 基因打靶 体细胞核移植
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 动物及兽医生物技术
• 页码范围: 329-338
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.150299

摘要

为了敲除山羊乳中致敏源β-乳球蛋白(BLG)基因,同时在BLG基因座定点整合人乳铁蛋白(hLF)基因.首先针对山羊BLG第3外显子识别位点设计了1对特异性TALEN-3-L/R质粒对;同时,构建了含有1个HSV-TK负筛选基因的hLF基因打靶载体BLC14-TK. TALENs质粒对转染山羊胎儿成纤维细胞,2 μg/mL嘌呤霉素筛选3d,PCR扩增产物测序来验证其切割DNA活性.打靶载体BLC14-TK与TALEN-3-L/R质粒对共转染山羊胎儿成纤维细胞,经700 μg/mL G418和2 μg/mL GCV共筛选药物抗性细胞株;通过整合检测和同源重组检测来筛选hLF基因打靶细胞株;BLG-/hLF+打靶细胞株作为供核细胞进行山羊体细胞核移植.结果为:TALEN-3-L/R致突变率为25％-30％;获得BLG-/hLF+打靶细胞6株;共制作重构胚胎335枚,移植受体山羊23只,B超检测到30-35 d的妊娠受体9只(妊娠率39.1％),其中1只50日龄克隆胎儿验证为BLG-/hLF+基因型.以上结果表明获得BLG基因座定点整合hLF基因的基因打靶山羊是可行的,为培育羊乳中含低致敏原和害含hLF的山羊新品系奠定了基础.